质粒拯救

生物科学领域术语

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质粒拯救(plasmid rescue)是一种确定随机未知基因的方法。首先将含有调节元件（如35S启动子）的质粒酶切后插入到植物基因组中。植物随机的某个基因会被调节，进而使植物出现表型变化。插入质粒的某个酶切位点（如Smal1），在被调节基因中也可能具有相同的酶切位点。

中文名: 质粒拯救
外文名: plasmid rescue

提出者: Perucho
提出时间: 1980年

基本概念

播报

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质粒拯救

这样，通过一种或多种酶切，就能够将全部或部分该基因连着插入质粒一起被切下来。之后，将切下片段自连成环状，使用调节元件的引物扩增，即可得到目的基因的部分或全部序列。如果得到的只是部分片段，使用5'或3'RACE也可得到全部序列

质粒拯救由Perucho在1980年首创，并用该法克隆鸡胸腺苷激酶基因。

主要原理

播报

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利用合适的限制性内切酶消化含有T-DNA插入的基因组DNA，直接用连接酶对消化产物连接环化，然后用高效的电击转化方法将连接产物转化大肠杆菌，通过抗性筛选获得阳性克隆，测序分析即可得到T-DNA的侧翼序列。质粒拯救技术的应用和载体的自身条件有很大的关系，首先要选用合适的载体，用于提供拯救质粒在转化宿主细胞中的复制起点和阳性克隆筛选基因，其次选用合适的核酸内切酶切基因组DNA，环化后得到一个只含有目的片段和抗性筛选基因的微效质粒即拯救质粒

质粒拯救

利用质粒拯救的方法比较直接，不受分离侧翼序列的分子量大小的制约，其目的性和准确性都很强，在早期作为一种克隆基因的方法被广泛用于果蝇、真菌、哺乳动物和拟南芥中，比较常用于从突变体中克隆基因。但是，质粒拯救的最大缺点就是应用范围受载体制约，应用范围较窄；在操作过程中与基因组DNA质量、酶消化、连接、大肠杆菌转化效率等各个环节密切相关，操作繁琐，费时费力；阳性克隆不能判断是否为相同的连接产物，往往造成重复测序；假阳性克隆比例较高，筛选繁琐，工作量大。因此，质粒拯救法已经不能够胜任功能基因组学时代的高通量的要求，只能作为其他分离方法无效时的一个补充。

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