从文献和网站里找到几个引物序列，我应该怎么尽量确认它好不好用？

可以使用NCBI数据库中的Primer-BLAST;进入页面后，在Primer Parameters中把引物上下游分别输进去；Primer Pair Specificity Checking Parameters中的Database选择Refseq mRNA,再点击GET Primer 就可以了。

在新的页面中，我主要关注下面这些点：

1.Products on target templates这一栏下面是否只有我的目的基因，如果有其他的基因，并且产物长度在几百，那就说明这个引物的特异性不是很好。产物长度在几千的话个人觉得可以忽略，因为不容易扩增出来。

2.产物长度最好在100-200左右

3.引物：引物长度在20-25左右，并且上下游引物的Tm值相差不要很大，大概60°左右吧。引物中GC%为40%-50%。3‘端最好G，C结尾。

我大概就是关注这几个类容，满足的话我就认为这个引物可以定来跑跑了。

你说的确认是怎么确认？实验还是软件？最基础的应该是是先看文献里他们用的怎么样，然后自己扔到软件里看一下，确定用的话再订购引物测试一下