��ѧ����-����PCR����
���ߣ�Jeffrey M. Perkel / �� �ߴ� ���캣 / �� ��Դ�� ����ʱ�䣺2014-9-1 15:55:1
����PCR����

 
����Լ��·���ս�˹��ѧLudwig������������Kenneth Kinzler��ͬ��Bert Vogelsteinһ�����������“����PCR”�ĸ�����˱�ʾ�з���һ������Ϊ�˸��õؼ���ϡ�еİ�ͻ�䡣“���ܵõ����������ģ���⣩����Դ�ڶԵ����ӵĹ۲⣬���ǵĵ���������Դ�ڴˡ�”Kinzler����˵��“����ӵ����ӿ�ʼʱ������Ӧ��Ҫô��100%��ͻ�䣬Ҫô��100%��Ұ���ͣ���ʹ�ô�Ұ���������ֳ�������ø������ס�”
 
��Ȼ������ʹ�ñ�׼PCRҲ���ҵ��dz�ϡ�еı����¼����Ͼ�PCR�ó��ӷ��ӵĴ������롣�����ϣ�����ȷ�������ѭ�������£�PCR��Ӧ�ܹ���һ�����ӵ�ģ��DNA���Ƴ���������Ӵ�˫���������Կ�¡��������߽���������Ӿ��⡣����һ���̲��Ƕ����ģ��о����޷������շ�Ӧ�еķ�����Ŀ���ƶ���ʼ��Ʒ�е�DNA������
 
ʵʱ����PCRͨ����������������Ӧ�������һ���⡣���磬ͨ��������ʱ��仯��ӫ��ǿ�����ߣ��о���Ա�ܹ��Ƚϲ�ͬ��Ʒ������������Ա�������Ȼ��ʵʱ����PCR�ľ��Զ���������ֱ�ӡ���һ����Ҫ��׼������������ת��Ϊ���Ե�Ũ�ȣ�������ЩŨ�Ⱦ�����ÿ����ڸ�ʵ���Ҽ�����仯��ʵʱ����PCRҲ���Լ����Щ΢С�Ŀ�����Ŀ�仯����������6����7���������������������ޡ�
 
������Ъ����ѧ�����ڡ�Fred Hutchinson��֢�о����ģ�FHCRC��ǰ��ԱMuneesh Tewari˵�����ֲ�ȷ���Խ����Ƚϸ��ӣ��������ݷ�������Ϊ�ڽ��������ʵ��ʱ������һ��ؼ����ơ�����������PCR����СRNA�����ǵĿ�����“ʵʱPCR���ܱ���ÿ�յľ�ȷ�ԣ���ʱ��������ȷ��һ��֮�ڵľ�ȷ�ԡ�”��˵��
 
����PCRͨ��“�������”�IJ����ƿ�����һ���⡣���ӻ���ﱻ��ɢ��ָ����������ķ�Ӧ���У�Խ��Խ�ã�������ÿ������ƽ����һ�������Ŀ������ᡣ��ÿ����������PCR��Ӧ��ʹ�ò���ͳ�ƽ������źŵļ���ת��Ϊһ������ֵ��
 
Kinzler����һ���̱���ɣ������ڵ������ж�100��ģ����ӵĻ���������һ����ͻ��ģ����в�������һ����Ӿͼ�ף�������ͻ��λ���ϵ������źŻ���Ұ���ͼ����“�������������ᷢ�֣��ڣ��źŷ壩�´�����һ����ʾ��ͬ�����ȡ��Сͻ����Ϊ�����������ӻ�����е�ռ��̫���ˡ�”������Щ����ϡ�Ͳ�����ֲ��ڶ��ط�Ӧ�У����ܲ�����99��Ұ�����źź�һ�����Ե�ͻ���źţ���������ֵġ����Զ����Ľ����
 
����PCR�������ǰ����źŴ������ź���“��”�������о���ԱĿǰ���ڸ����������һ���ԣ��Ӽ�鿽����Ŀ�仯��ɢ������DNA�������̲�����������̥��Ⱦɫ���쳣��⡣�������ٴ�Ӧ�ã������п��ܴ���һ�����л��棨�������ּ����ļ��׳̶��ʺ��ٴ�ʵ���ҵĹ������̣���
 
ԭʼ������PCR
 
Kinzler��Vogelstein��ԭʼ“����PCR”����������1999�꣬��һ�����ζ����Ҫ�ֹ������İ취��������Ҫ��������ֱ�������߷����Ʒ�е�K-RASͻ�䣬��˽�������DNAϡ�Ͳ��ȷ���384��΢���ζ���ĸ������У�����������ʹ����˵�����Ʒ��������������˰�����Ѱ�ҵ�ͻ���ȵ�Ļ�������
 
һ����Ӧ��ɣ�������PCR�������Ǹ��ն�PCR��������Ȼ������ˣ������ǽ�����ӫ��̽������ӽ���һ����Ϊ����Ӧ��һֱ�ӽ����ڶ����ǽ�����Ұ�������н�ϣ�����ȡ��������г���100���׾��л�����DNA���������ĸ���ʾ��ͻ�䡣
 
Kinzler˵����һ�����������PCR��“һ�ַdz�ǿ�󡢿��ź�׼ȷ��”ϡ��ͻ���ⷽ��������Ҳ���Ͷ��ܼ��͵ļ�������������“˵��һ���о���ȥ�����ʵ�������Dz����ܵġ�”��˵��
 
2003�꣬Kinzler��Vogelstein�����һ����֮Ϊ“BEAMing”���װ沽�裬��������“���ӡ��黯�������ʹ�������”��BEAMing������ֹ���΢�װ��н�����Ʒ��ɢ����ÿ���Ͱ�ˮ�黯��С�α���˷�Ӧ������ͨ��ʹ��Ŀǰ�㷺������һ��DNA�����Ŀ��Ʊ��е��黯PCR���̣�BEAMing��ģ�塢���PCR�Լ��ʹ���Ļ�������С���У����д������С�β����л�ֻ����һ��ģ�塣PCR��ɺ��������������ͨ��������——��ø�׺��صļ��Ϲ����ڴ����ϣ��黯����֮�ᱻ��ɢ�����Ӿ���ͨ������Ѻ��������ʽϸ���ǵ��ӽ�������ȡ��
 
BEAMingȡ�����ڿװ��ϵ��ֹ�������“�ܹ������൱��ʮ�����”��Kinzler˵������Ȼ��ʹ����һ������������Vogelstein������ͬ��һ�𣩳�����Inostics��˾���������ҵ������Inostics���Sysmex��˾�չ�������Kinzler�������иù�˾�Ĺɷݡ���
 
����Һ�εIJ���Ҳ��Bio-Radʵ���Һ�RainDance�Ƽ���˾��������ҵ������ͬ�ڴ��飬�����ҹ�˾����PCR�������ɢ���ֻ�����RainDance�Ķ��³�����ϯִ�й�S. Roopom Banerjee��˵��“Һ�λ�”������2���������С��Bio-Rad��˾��QX200������1ǧ���Ƥ����С�ģ�RainDance��˾��RainDrop��Һ�Ρ�PCR���������󣬷�Ӧ����Ϳ���ͨ��ӫ��ɢ��Դ�ͼ��������ȡҺ�Σ������ȥϸ��֮�����ʽϸ���ǡ�
 
Banerjee˵��“���������һ̨�������”����˵RainDance��˾��RainDropϵͳ��һ��ʽ����ƣ�“Appleʽ�ļ򵥡�����һ�ž��ж�ɫ�ʺͶ��εĸ�����Ƭ�����������Ļ������ǽ���Ƭ���ػ�����С�ߴ�����أ�Ȼ����Ķ���ÿ��������׼ȷ˵������������Ƭ�е����ݡ�”��RainDance��˾�İ����У���Ҫ�õ�4��Сʱ����ȡ8ǧ���������“����”����8��ƽ������PCR��Ӧ���������
 
��ǿ�IJ���ͳ��
 
����dPCR��һ���ն˷����������Ŀ�����û�кܺõ���ɢ������һЩС���ڽ���ʱ���в�ֹһ���İб꣬��ô�����Ͻ���õ���Ũ�ȿ��ܾͻ���֮���á�����Dz���ͳ�Ʒ������õĵط�����Bio-Radʵ������������ѧ���Ŀ�ѧ��������George Karlin-Neumann�ƣ�����ͳ��������һ������ֲ���ֻҪС��û�дﵽ���ͣ��û��Ϳ��Է���������ʼ�ķ���������ʹһЩ����ʵ���������˲�ֹһ�����ӣ��������������PCR�ж�����һ��������“����������ж���С�һ��߶���Һ�Σ������ң������ж����������ԡ����ͻ�����ϸ����ҳ�ʼ��Ũ�ȣ���Ҳ������������С��������С�ҵı�����”��˵��
 
����˹����Ī������ʵ����ҽ�������Ŀ������Reginald Beer���о���ʱ�����˵�һƪ�ڵ���ɢ�ԣ�Ҳ����˵��Сһ�£�Һ���н�������PCR�ı�������˵����Һ�η���������������������ԣ����ӷ�Ӧ���������������˵�ܼ򵥣��������ݵ�����Ҳ����֮����“��������������˷�Ӧ����������ʱ�����ɾ���Ҳ�ʹ�������ˡ�”�����͵���
 
��ƪ����ķ���������Bio-Rad��RainDance������PCRƽ̨��Ч�ܣ��Լ�����PCR����չӦ�õĶ����ԡ����磬RainDance��˾��ƽ̨�����ڼ���񾭽��������ߵ��Լ���Һ��ͻ������ת¼��������Դ��ֱ��������Ѫ���е�KRASͻ�䡣
 
FHCRC��ԱJason Bielasʹ��Bio-Rad��ϵͳȥ���������ѳ�����������͸���ܰ�ϸ������������ʢ�ٴ�ѧʵ��ҽѧϵ����ѧ��������ڡ�FHCRC��ԱKeith Jerome�������з���һ�ַ�����ʹ���ܹ����ֻ���HHV-6����Ѫ֢�����ϻ������DZ�ڲ���������������ڹ�����ֲ�Ĺ����У����봦��ǰ�߶��Ǻ��ߣ�����ͨ���������п�������ѪҺ�ж�Ӧ������ı����������֣��ڻ��������ϵ������ӦΪ1.0����
 
Bielas��ʾ�������Ŷ��ܹ�ʹ�������Դ���QuanTILfy�������ܹ����ظ��طֽ�������10000����ϸ���е�1��T�ܰ�ϸ�������Լ��Tϸ��������ɢ�뻼�ߴ��֮�����ϵ�������ַ����뵱ǰ��׼�������黯������ȸ��������������͵���“�����ϣ����Ƕ�Tϸ����������м�����”
 
˹̹�������鼼�����ĸ߼�������Hanlee JiҲ��ʹ��Bio-Radϵͳ����֤����������о��е��Ŵ�ƫ�����Ҳ�����ڲ���ǰ����һ�������Ŀ�Ķ�����Ʒ���ж������������Ŷ���˵������PCR����������������ԣ��������ڼ�������һ����������ʵ������ѧ���������PCR����ʵʱ����PCR���ѵ�ʱ����᳤�ܶࡣ
 
“�ҶԼ�����һ������ǣ��������һ������ʵ�鼼�ܵı���������һ̨������ǰ�������ܷ��ڼ��ܵ�ʱ���ڰ�Ҫ������Ժ����Զ����еõ���ȷ�Ľ����������ԣ���˵�����ϵͳ�ܺ��á�”
 
����PCR�����
 
2011�꣬Kinzler��Vogelstein�������һ������ϡ�е�λ�����������PCR��������һ���ǻ��ڲ������ȫ����ϵͳ��Safe-SeqS���IJ�����Ҫ��ÿ��ģ����ӱ�Ƕ��صı�ʾ����������룩��Ȼ���������������һ��DNA������ж�ȡ��
 
Լ��·���ս�˹Ludwig����ת���Ŵ�ѧ�����Ρ�Լ��·���ս�˹ҽѧ�о�������ѧ����Nickolas Papadopoulos�Ǹ��о��Ĺ�ͬ���ߡ�����Ϊ������BEAMing����Safe-SeqS�����о��߽�����PCR��������չ������λ��——�ﵽ30���������ϡ�
 
“���ģƽ�в��������һ�ּ���ǿ�������PCR��ʽ�������ģ������ܹ��õ����������”Papadopoulos���乲ͬ������2011����о��н��͵���“�������Ƴ����˴�ͳ������PCR���������ж��ؼ�����Եõ����Ρ������Զ�����⡣”������������������ͼ���еĴ�����һ���������Ĺ�������ʸߵ��������Խ��ܡ�ͨ����ÿ����ʼ�����ϵĶ��ر�ʾ�Safe-SeqS����ʹ�о�������������ͻ��ͳ��򻯵���Ϊ����
 
��������о��У�����������10���������ϸ����CTNNB1�����ͻ�䡣ԭʼIllumina�����ȡ�Ĵ�����Ϊ2.1×10-4��Safe-SeqS�����ǩ���Խ���һ���ʽ���24�����ﵽ9×10-6��������������DNAʱ��Safe-SeqS�ܽ��۲�����ʽ���15����
 
��ȥ��һ���У����Ŷӽ�Safe-SeqS��չ���ڳ����������Ĺι�������Ѱ���ѳ������ӹ���Ĥ���͹������Ķ����źţ������з������������ڼ��ϵͳ�ĵ�һ��������������У����Ŷ�ʹ����һ����������12����֢��ػ�����������46�����������ͻ�䡣
 
����������ʥ���Ǹ���е���������ѧ�����ϣ�Papadopoulos��������һ��������˵��Safe-SeqS���ܻ��Ѫ�����������ڼ��ʮ�����á������ϣ������Ŷ��ܹ��ڳ���80%������Ѫ����Ʒ�м�⵽ͻ�䡣����һЩ�����͵ı��ֱ�������Ҫ�á���˵���������ѵ����Բ��Ķ���������“Ŀǰ�����ǽ��ܴ�10%�ľ������������͵Ļ���Ѫ���м���ͻ��”��
 
�������еIJ���
 
���������޸�˹��ѧ�����ѧԺ��������Andrzej Pietrzykowski��˵������PCR�ľ�ȷ�Զ����������棬���о��ƾ����ķ��Ӻ��Ŵ��������������ĺܶ�仯��С��2�������Ա�ʵʱ����PCR��ʶ����˵����һ����Ѿ����������ֻ��м�⵽��
 
PietrzykowskiҲ�ᵽ����һ���ŵ㡣��������һ���ض�СRNA������ƾ������أ������ܹ�ʹ��ʵʱ����PCR��������һ���ӡ�����ʵʱ����PCR������������СRNA��ǰ����˵ȴ������ɣ���Ϊ����׼���߱궨ȷ���ɿ��Ķ�����������ġ�“����Ҫ�����λ����μ����Щ���滷���仯�Ŀ��һ���”���������PCR��˵�������⣬��Ϊ���������Ҫ��׼���ߡ�
 
Pietrzykowski������������˾����PCRӦ�û�����Ŀ������»�������֮һ������2013��ĩ��������˸ù�˾��QuantStudio 3-DоƬ��ȡ����оƬ����������ѭ���ǡ�QuantStudio 3D����PCRϵͳ����Kinzlerԭʼ����PCR�Ĵ����������档�о���ʹ����һ�ֽ����ڵ��粣��“�𽺹���”�Ĺ��߽���Ʒ��ɢ��2���ʴ���ڹ�Ƭ�����С���С�Fluidigm��˾Ҳʹ����һ��������IJ��ԣ����ǵ�qdPCR 37Kϵͳ“����������·”�����˸ù�˾��΢����ר�����ɽ�48����Ʒ����ֲ���770��С���У�����ÿ����Ʒ�ܹ���ɢ�ڶ���С���������ȷ�ʣ���37000������
 
����Խ��Խ����ض����������ٴ���Ӧ�ö��ԣ���һ�������Ծ���������ơ����Ȳ�Ҫ�������ʵʱ������ѭ���ǡ����ڴ󲿷��о�����˵������PCR������ʵʱ����PCR�IJ��䣬�������������ȷ��Beer˵����������Ӧ�ö���ʵʱ����PCR“Ŀǰ����”�����ң���һ�������ӳ��첢�ҷ���Ҳ���������ˡ�“��ͨ���ĽǶ�������ʵʱ����PCR�Ծ����������ơ�”����������˾�����ڱ���Ĭ�������Ƽ���˾�չ�������PCR�߼���Ʒ����Iain Russell��ʾ��“̹�ʵؽ������������������ϴ���Ӧ�õĿͻ�����”
 
“��ȷʵȡ��������������⡣”Pietrzykowski˵����
 
������֮һ�ߴ�ϵ�й���ѧԺ�����о��������о�Ա��
Jeffrey M. Perkel ������������ݲ�������Ŀ�ѧ����׫���ˡ�
    ��л��“ ԭ����������ѧ�ٽ��ᣨ
www.aaas.org��������2014 ��4 ��11 �ա���ѧ����־”���ٷ�Ӣ�İ����http://www.sciencemag.org/site/products/lst_20140411.xhtml
 
����ѧ���š� (��ѧ����2014��8�¿� ��ѧ������)
��E-mail����      
| ��ӡ | ���� |