新型冠状病毒核酸检测的原理是什么?

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8 个回答

感觉之前的回答非常emmm(草率?),还是重新写写。


先上总结:


1.病毒分离鉴定法


2. 基于PCR的病毒检测方法

还可以看一看知乎的这2篇文章,了解基本原理:

1min视频快速了解:

冠状病毒核酸检测https://www.zhihu.com/video/1251099980939001856

3. 胶体金试纸法

样品滴到试纸上,通过层析作用,首先经过胶体金结合区域,样品中的目标分析物在该区域与胶体金结合,并且带动胶体金一起向前运动。当经过测试线时,目标物与固定在此的抗体相结合,同时也留住了目标物所结合的胶体金,胶体金在此聚集形成第一道红线;另外,未被捕获到的胶体金继续向前运动,当到达质控线区域时,胶体金会被固定在此的二抗所捕获,从而在此处也留下一道红线。

检测线位置的红线代表样品中含有目标分析物,没有则代表结果为阴性,而质控线无论结果如何都会出现红线。若没有出现,则说明该次检测结果无效。


质控线C显色则有效,质控线C无色则无效;检测线T显色则阳性,检测线T无色则阴性

详情指路这篇文章:

虽然这篇文章讲述的是抗体检测,而不是题主问的核酸检测,但是把纳米金表面修饰的抗体换成capture DNA,捕获病毒核酸,也可用类似原理进行检测。

附上相应视频:

抗体检测操作步骤https://www.zhihu.com/video/1251103749164568576


还可以用电分析、SERS(表面面增强拉曼光谱)进行检测。

图A颜色变化,可用吸收光谱法进行定量;B电沉积(Ag)可用于信号放大;D运用了B技术的DNA阵列电导分析法;E运用SERS的检测方法。由于需要仪器辅助,不如颜色直观方便。
颜色变化,吸收光谱可进一步定量
target DNA为病毒核酸。电导分析:原DNA阵列电阻较大,若存在Target DNA则可捕获并进一步结合纳米金(步骤1),利用Ag进行信号放大(步骤2),电阻减小。

由于贵金属的纳米颗粒具有较好的拉曼信号,也可用SERS进行检测。


4. 基于核酸等温扩增的病毒分析


5. 基于生物传感器的病毒分析

举例:CRISPR-Cas——SHERLOCK

背景:

张锋团队在2016年报道了一种Cas蛋白C2c2,它除了特异性切割gRNA靶向互补序列的活性外,其被激活后还具有切割周围单链RNA的活性——附带切割(Collateral Cleavage)活性。

设计:

体系中除了加入与待检测RNA互补配对的crRNA(gRNA)外,还引入两端带有荧光基团和猝灭基团的单链RNA。带有荧光和猝灭基团的单链RNA被切割之后,猝灭剂无法继续猝灭荧光信号,因此可通过荧光信号的增强来实现对待测RNA的检测。

SHERLOCKv2则将待切割的RNA单链两端修饰的荧光基团和猝灭剂,更换为FAM和Biotin修饰,从而摆脱对于定量荧光检测设备的依赖,更便携、快速。两种基团在液体推动下以连接/被切断状态通过纳米金颗粒-FAM抗体层的现象不同,从而实现检测。


具体可参考这篇“黄硕课题组”公众号推文:



还是补一个ELISA吧(看起来完整一丢丢)


以上若有错误,烦请指正!

检测原理:对新型冠状病毒(2019-nCoV)ORF 1ab及编码核衣壳蛋白N基因的特异性保守序列为靶区域,进行了双靶标基因的设计,配以PCR反应液,在荧光定量PCR仪上,应用实时荧光定量PCR检测技术,实现新型冠状病毒RNA精准检测。以上厦门基源医学实验室的检测方式和原理,相对科学和专业。