- 中文名
- 苏木精 — 伊红染色法
- 外文名
- hematoxylin-eosin staining
- 简 称
- HE染色法
- 应用领域
- 生物医学
构成组织内蛋白质的氨基酸的种类很多，它们有不同的等电点。在普通染色法中，染色液的酸碱度为pH6左右，细胞内的酸性物质如细胞核的染色质、腺细胞和神经细胞内的粗面内质网及透明软骨基质等均被碱性染料染色，这些物质称为嗜碱性。而细胞质中的其它蛋白质如红细胞中的血红蛋白、嗜酸粒细胞的颗粒及胶原纤维和肌纤维等被酸性染料染色，这些物质称为嗜酸型。如果改变染色液的酸碱度，pH值升高时，则原来被酸性染料染色的物质可变为嗜碱性；pH值降低时，原来被碱性染料染色的物质则可变为嗜酸性。所以说染色液的pH值可以影响染色的反应。
脱氧核糖核酸（DNA）两条链上的磷酸基向外，带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木精碱性染料以离子键结合而被染色。苏木精在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。伊红Y是一种化学合成的酸性染料，在水中离解成带负电荷的阴离子，与蛋白质的氨基正电荷的阳离子结合使胞浆染色，细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织、嗜伊红颗粒等被染成不同程度的红色或粉红色，与蓝色的细胞核形成鲜明对比。伊红是细胞浆的良好染料。
由于组织或细胞的不同成分对苏木精的亲和力不同及染色性质不一样。经苏木精染色后，细胞核及钙盐粘液等呈蓝色，可用盐酸酒精分化和弱碱性溶液显蓝，如处理适宜，可使细胞核着清楚的深蓝色，胞浆等其它成分脱色。再利用胞浆染料伊红染胞浆，使胞浆的各种不同成分又呈现出深浅不同的粉红色。故各种组织或细胞成分与病变的一般形态结构特点均可显示出来。
A：0.5~1% 的伊红酒精溶液：
苏木精6 g
无水乙醇100 ml
硫酸铝钾150 g
蒸馏水2000 ml
碘酸钠1.2 g
冰醋酸 120 ml
甘油 900 ml
常规he染色步骤
(2) 二甲苯（Ⅱ） 15 min
(3)二甲苯：无水乙醇=1:1 2min
(5) 100%乙醇（Ⅱ） 5 min
(6) 80%乙醇 5min
(7) 蒸馏水 5 min
(8) 苏木精液染色 5 min
(10) 1%盐酸乙醇 30s
(11) 水洗 30 s
(12)蒸馏水过洗 5 s
(13) 0.5%伊红液染色 1-3 min
(14) 蒸馏水稍洗 30 s
(15) 80%乙醇稍洗 30 s
(16) 95%乙醇（Ⅰ）1 min
(17) 95%乙醇（Ⅱ） 1 min
(19)无水乙醇（Ⅱ）3 min
(20)二甲苯（Ⅰ） 3 min
(21)二甲苯（Ⅱ） 3 min
冷冻切片HE染色步骤
（2）稍水洗 1～2 s
（3）苏木精液染色（60℃） 30～60 s
（4）流水洗去苏木精液 5～10 s
（5）1%盐酸乙醇 1～3 s
（6）稍水洗 1～2 s
（7）促蓝液返蓝 5～10 s
（8）流水冲洗 15～30 s
（10）蒸馏水稍洗 1～2 s
（11）80%乙醇 1～2 s
（12）95%乙醇 1～2 s
（15）二甲苯（Ⅰ） 2～3 s
（16）二甲苯（Ⅱ） 2～3 s
（17）中性树胶封固。
注：第（14）步如果不用石炭酸二甲苯，可改用无水乙醇。
注意事项
切片脱水透明 切片经HE染色后，要彻底脱水透明，才能用中性树胶封盖。如果脱水不彻底，封片后呈白色雾状，镜下观察模糊不清，且容易褪色。切片1-2级无水乙醇脱水，也可使用石炭酸二甲苯进行脱水。石炭酸有较强脱水能力，但长时间可使切片脱色，因此要经过多次二甲苯以使石碳酸完全除去。
实验结果
细胞核被苏木精染成鲜明的蓝色，软骨基质、钙盐颗粒呈深蓝色，粘液呈灰蓝色。细胞浆被伊红染成深浅不同的粉红色至桃红色，胞浆内嗜酸性颗粒呈反光强的鲜红色。胶原纤维呈淡粉红色，弹力纤维呈亮粉红色，红血球呈橘红色，蛋白性液体呈粉红色。
着色情况与组织或细胞的种类有关，也随其生活周期及病理变化而改变。例如，细胞在新生时期胞浆对伊红着色较淡或轻度嗜碱，当其衰老时或发生退行性变则呈现嗜伊红浓染。胶原纤维在老化和出现透明变性时，伊红着色由浅变深。
H-E染色评定标准：
（1）切片完整，厚度4-6微米，厚薄均匀，无皱褶无刀痕；
