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Definición de la prueba de Hopkin’s Cole
La prueba de Hopkin’s Cole es una prueba específica utilizada para la detección de indol.anillo y, por tanto, triptófano en proteínas. La prueba también se denomina “prueba de ácido glioxílico”, ya que el reactivo contiene ácido glioxílico. La prueba fue descubierta por Frederick Gowland Hopkins y Sydney W. Cole en 1901 como parte de su trabajo sobre el descubrimiento del triptófano. La prueba de Cole de Hopkin es extremadamente similar a la reacción de Adamkiewez, que es similar en principio a esta prueba. La prueba Cole de Hopkin fue criticada por Rosenheim, quien argumentó que el ácido glioxílico utilizado en la prueba podría descomponerse fácilmente en formaldehído y dióxido de carbono a altas temperaturas. Rosenheim descubrió el uso de formaldehído para detectar triptófano. La prueba de Hopkin’s Cole es una de las reacciones de color utilizadas para la detección de aminoácidos o proteínas particulares sobre la base de la formación de un color específico.
Objetivos de la prueba Cole de Hopkin
- Detectar la presencia de anillo de indol que contiene aminoácidos en proteínas.
- Detectar la presencia de proteínas que contienen triptófano.
Principio de la prueba Cole de Hopkin
La prueba se basa en el principio de que la capa de ácido sulfúrico concentrado sobre una mezcla de proteínas que contienen triptófano con el reactivo de Hopkin’s Cole da como resultado la formación de un anillo violeta en la interfaz. El ácido glioxílico agregado a la muestra combina dos moléculas de triptófano actuando sobre el anillo de indol de las moléculas de triptófano. El producto de condensación así formado se deshidrata para formar un pigmento de color violeta. El color desarrollado en la prueba se debe al grupo indol de la molécula de triptófano, que se convierte en un compuesto coloreado por oxidación provocada por el grupo aldehído del ácido glioxílico. El H 2 SO 4 agregado al reactivo ayuda a estabilizar el ácido glioxílico y evita su descomposición y la liberación de dióxido de carbono.
Reacción
Triptófano + Ácido glioxílico → Producto de condensación + H 2 O → Compuesto de color violeta + H 2 O
Requisitos
Reactivo
- Reactivo de Hopkin’s Cole: Ácido glioxílico : se puede preparar exponiendo el ácido acético glacial a la luz solar durante unos días.
- H 2 SO 4 concentrado
- Muestra: solución de aminoácidos al 0,1%
Material requerido
- Tubos de ensayo
- Soporte para tubos de ensayo
- Pipetas
Procedimiento de la prueba Cole de Hopkin
- En un tubo de ensayo se toman 2 ml de ácido acético glacial expuesto a la luz y 2 ml de la muestra líquida.
- A esto, se agrega H 2 SO 4 concentrado a lo largo de los lados del tubo de ensayo mantenido en una posición inclinada. Deben formarse dos capas distintas de líquido sin mezclar.
- Se debe observar el tubo de ensayo para detectar la formación de un anillo de color en la interfaz de dos capas.
Resultado e interpretación de la prueba Cole de Hopkin
- Resultado positivo: un resultado positivo está representado por la formación de un anillo de color púrpura en la unión de dos capas. Esto indica la presencia de proteínas que contienen triptófano.
- Resultado negativo: un resultado negativo se representa por la ausencia de un anillo de color púrpura en el tubo de ensayo. Esto indica la ausencia de proteínas que contienen triptófano.
Usos de la prueba Cole de Hopkin
- La prueba se utiliza para la detección de proteínas y aminoácidos en una muestra.
- La prueba es una prueba simple y fácil de realizar que ayuda a identificar el triptófano de otros aminoácidos.
Limitaciones
- Compuestos como nitritos, cloratos, nitratos y cloruros en exceso previenen la formación del producto de condensación.
Dr. Martin Passen, a dedicated nutrition educator with a master’s in nutrition education and nearing completion of a clinical nutrition and dietetics master’s. Passionate about sharing valuable information effectively.