Re: [求救] 我的western><~~~~~~~~

請問你是跑大片的嗎?用到60ug/well 如果是小片的page，可能量太多了 而且我也覺得是ecl你加太久了 我也是用二三分鐘就去壓片了 不然ecl一下就眊光了 不然就是你的一抗可能壞了(可能沒分裝或反覆冷凍解凍之類的) 你實驗室的人做的出來嗎? 還是只有你的沒做出來? 二抗太濃的話，你只會壓出黑壓壓的一片，不會都是空白片 你的二抗是怎麼保存的呢?如果是空白片，您可能二抗反而要加濃一點吧 還有你的顯影劑，是不是新鮮的，還是都是黑的了? 您是手洗還是用洗片機洗呀? ※ 引述《babyfinerain (心香水)》之銘言： : 小妹的western已經一個月了.... : 押出來全部都是空白片@@..... : 後來受不了了>< : 這禮拜把啥都試了.... : 60 ug sanple : 膜上有蛋白~所以transfer沒問題 : 以一抗 actin 為例 overnight 4度 : 二抗 anti-mouse IgG 1:5000 2~3小時 : 柏森的ECL 加了之後約15分鐘路程...壓片---> 空白 : 今天把ECL拿到暗房加 : 發現...是有band的.... : 加了ECL後...有很亮的band...但是過一下下就不見了 : 壓片時也只有弱到快不見的的痕跡 : 為啥會這樣呢???? : 這和我之前的條件都一樣..但是之前壓出來的片很漂亮 : 自從某次之後都在也壓不出來了...全都是很乾淨的空白片 : 參考板上說的...是不是2抗太濃?? : 但是之前作也是1:5000也很OK阿 : 請問各位先進~~~還有什麼原因呢??? : 之前用一樣的條件都是在實驗室加完ECL後去壓片 : 因為等電梯所以約30分鐘 : 但壓出來還是很漂亮阿 : 而且都還是用弘晉ECL : 但是最近是怎麼都做不出來.... : 我已經到了疑心疑鬼的地步了><~~~ : 嗚~~~哪位好心人可以告訴我到底為什麼><~~~~~~~~~ : 上帝一定會非常保佑您的><~~~~~~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 61.64.162.223